Hogyan izolálják és tisztítják az emlős fehérjéket a laboratóriumban?

Sziasztok, tudományrajongó kollégák! Emlősfehérjék szállítójaként nagyon szívesen megosztom a csínját-bínját, hogyan izoláljuk és tisztítjuk ezeket a csodálatos molekulákat itt, a laboratóriumban. Ez egy vad utazás, tele klassz technikákkal és észjárással – elképesztő tudomány. Szóval, merüljünk bele!

Az emlős fehérjék megértése

Először is, az emlős fehérjék meglehetősen különlegesek. Döntő szerepet játszanak a szervezetünkben zajló mindenféle biológiai folyamatban, az izomösszehúzódástól az immunválaszig. Ezek a fehérjék különféle emlősforrásokban, például tejben, vérben és szövetekben találhatók. Beszállítóként pedig folyamatosan azon vagyunk, hogy mi a legjobb módja annak, hogy tiszta, kiváló minőségű emlős fehérjéket kínálhassunk ügyfeleinknek.

Az emlős fehérjék forrásai

Az általunk használt források sokfélék. Például a tej aranybánya. A tehéntej jól ismert fehérjetartalmáról, de egyre népszerűbb a tevetej is. Nézze meg a miKínai tevetejpor szárított teljes tej minden íz nélkülésTeljes tejpor, azonnal oldódó teljes tejpor cukrászati ​​és tejtermékekhez. Ezek nagyszerű forrásai az emlős fehérjéknek. Mi is foglalkozunkKínai nagykereskedelmi teve tejpor nyers teve - tej - por, mely egyedi fehérjékben gazdag alapanyag.

Emlős fehérjék izolálása

Minta előkészítés

Az izolálási folyamat a minta előkészítésével kezdődik. Amikor mintát kapunk, mondjuk tejet, először meg kell győződnünk arról, hogy megfelelő állapotban van. Szűrjük, hogy megszabaduljunk a nagy részecskéktől, például zsírgömböktől vagy törmeléktől. Ez a lépés döntő fontosságú, mert ha nem tisztítjuk meg a mintát, az összezavarhatja a későbbi tisztítási lépéseket.

Sejtlízis (ha sejtekből vagy szövetekből származik)

Ha a forrásunk sejtek vagy szövetek, fel kell törnünk azokat, hogy felszabaduljanak a fehérjék. Ezt sejtlízisnek nevezik. Ennek néhány módja van. Az egyik általános módszer a tisztítószerek használata. A detergensek lebonthatják a sejtmembránokat, így a fehérjék kifolyhatnak az oldatba. Egy másik módszer a mechanikai lízis, például homogenizátor használata. Ez olyan, mintha a sejteket nagyon durván megrázná, hogy szétszakadjanak.

Centrifugálás

A lízis után centrifugálást alkalmazunk. Ez olyan, mint egy szupergyors centrifugálás. A mintánkat egy centrifugába tesszük, és nagyon nagy sebességgel forog. A minta nehezebb részei, mint a sejttörmelékek és az organellumok, lesüllyednek az aljára, és pelletet képeznek. A fehérjék a folyékony részben, az úgynevezett felülúszóban maradnak. Gondosan összegyűjtjük a felülúszót, mert ott vannak értékes fehérjéink.

Az emlős fehérjék tisztítása

Kromatográfia

A kromatográfia az általunk használt egyik legfontosabb tisztítási technika. Különböző típusok léteznek, de kezdjük az ioncserélő kromatográfiával. A fehérjék az aminosav-összetételüktől függően eltérő töltéssel rendelkeznek. Az ioncserélő kromatográfiánál specifikus töltésű gyantával töltött oszlopot használunk. Ha fehérjéinknek a gyantával ellentétes töltése van, akkor ragaszkodnak hozzá. Ezután megváltoztathatjuk a körülményeket, például a sókoncentrációt, hogy a fehérjék leragadjanak és egyenként kijöjjenek az oszlopból.

Egy másik típus a méret-kizárásos kromatográfia. Ahogy a neve is sugallja, ez a módszer a fehérjéket méretük alapján választja szét. Az oszlop tele van apró gyöngyökkel, amelyeknek különböző méretű pórusai vannak. A kisebb fehérjék beszorulhatnak a pórusokba, míg a nagyobb fehérjék gyorsabban áramlanak át az oszlopon. Így a fehérjéket molekulatömegük szerint különíthetjük el.

Affinitáskromatográfia

Az affinitáskromatográfia szuper jó. Kihasználja a fehérjék és más molekulák közötti specifikus kölcsönhatásokat. Például, ha a proteinünknek van egy specifikus kötőpartnere, akkor ezt a partnert az oszlopban lévő gyantához köthetjük. Amikor a mintánk áthalad az oszlopon, a célfehérje a gyantán lévő partneréhez kötődik, míg más fehérjék átfolynak rajta. Ezután speciális megoldással megtörhetjük a kötődést és megkaphatjuk a megtisztított fehérjét.

Ultraszűrés

Az ultraszűrés egy másik praktikus eszköz. Kicsit olyan, mint egy szuperfinom szita. Meghatározott pórusméretű membránt használunk. A kis molekulák és a víz átjutnak a membránon, de a nagyobb fehérjék visszamaradnak. Ez segít abban, hogy koncentráljuk a fehérjeoldatot, és megszabaduljunk minden apró szennyeződéstől.

Minőségellenőrzés

Miután izoláltuk és megtisztítottuk emlős fehérjéinket, nem csak azonnal küldjük ki őket. Szigorú minőség-ellenőrzési folyamatunk van. Olyan technikákat használunk, mint az SDS - PAGE (nátrium-dodecil-szulfát - poliakrilamid gélelektroforézis) fehérjéink tisztaságának ellenőrzésére. Olyan ez, mint egy verseny a fehérjékért. A fehérje mintáinkat gélbe töltjük, majd elektromos áramot vezetünk. A fehérjék méretüktől függően mozognak a gélen. Ha egyetlen sávot látunk, az azt jelenti, hogy fehérjénk elég tiszta.

Tömegspektrometriát is használunk fehérjéink molekulatömegének pontos meghatározására. Ez segít abban, hogy megbizonyosodjunk arról, hogy a megfelelő fehérjét kapjuk, és hogy az nem bomlott le vagy módosult az izolálási és tisztítási folyamat során.

Miért fontosak izolált és tisztított emlősfehérjéink?

Az általunk szállított fehérjéket az alkalmazások széles körében használják. A gyógyszeriparban felhasználhatók új gyógyszerek kifejlesztésére. Például egyes fehérjék antitestként működhetnek a betegségek leküzdésében. Az élelmiszeriparban az emlős eredetű fehérjéket az élelmiszerek tápértékének és állagának javítására használják.

És mivel ilyen szigorú elkülönítési és tisztítási technikákat alkalmazunk, ügyfeleink biztosak lehetnek abban, hogy kiváló minőségű, tiszta emlős fehérjéket kapnak. Akár kutató egy laboratóriumban, akár élelmiszergyártó, aki a legjobb összetevőket keresi, termékeink nagyszerű választást jelentenek.

Csatlakozzunk a beszerzéshez

Ha érdeklik az emlős fehérjéink, és beszerzési vitát szeretne indítani, ne habozzon, lépjen kapcsolatba velünk! Mindig szívesen dolgozunk új ügyfelekkel, és segítünk megtalálni az igényeinek megfelelő fehérjetermékeket. Legyen szó kutatásról, élelmiszer-előállításról vagy bármilyen más alkalmazásról, mi mindent megtalálsz.

Hivatkozások

• Lodish, H., Berk, A., Kaiser, CA, Krieger, M., Scott, MP, Bretscher, A.,... & Matsudaira, P. (2008). Molekuláris sejtbiológia. WH Freeman.
• Deutscher képviselő (szerk.). (1990). Útmutató a fehérjetisztításhoz. Akadémiai Kiadó.